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                酵母蛋白表达

                酵母蛋白表达

                强耀生物科技有限公司已成功构建完整的各种蛋白表达技术平台:包括原核蛋白表达与纯化、酵母蛋白表达与纯化、昆虫细胞蛋白表达与纯化、哺乳动物细胞蛋白表达与纯化。根据客户的需求,我们提供从基因合成,载体构建,基因表达,蛋?#29366;?#21270;、检测等一站式服务。为了保证蛋?#29366;?#21270;的质量,强耀生物建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及成熟的服务。 我们的蛋白质团队在优化基因密码子、表达载体的设计和构建、融合对象和标签的选取、特定蛋?#29366;?#21270;系统的选择、蛋白生产工艺的优化等方面,拥有较多的经验。可以满足客户个性化的需求。

                酵母蛋白表达
                重组蛋白表达与纯化技术服务(P. Pichia表达系统)

                强耀生物科技有限公司目前成熟的表达体?#34507;?#25324;:原核表达系统(大肠?#21496;?E. coli表达系统)、酵母表达系统(P. Pichia)表达建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及成熟的服务。 技术服务按步骤收费,您可以选择从以下?#25105;?#19968;步开始提供服务或仅选择其中的单独一步,详细价格请垂询。

                ?酵母表达系统——步骤1. 目标基因?#24378;?#38534;至酵母表达载体:
                扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
                将目标基因?#24378;?#38534;到合适的表达质粒上。
                测序验证构建质粒的准确性。
                可提供表达载体:pPICZα和pPIC9K
                提供客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
                服务周期:1周
                ?酵母表达系统——步骤2. P. Pichia表达菌株电转化:
                酶切线性化表达质粒。
                将表达质粒通过电转化到高效的P. Pichia表达菌株中。
                利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(Tag),再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。
                通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆。
                可提供表达菌株:X33,GS115,KM71和SMD1168。
                提供客户:PCR阳性克隆及PCR结果报告。
                时间:1周
                ? 酵母表达系统——步骤3. P. Pichia表达菌株筛选:
                将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增,?#32531;?#25442;至BMMY培养基中,并加入甲?#21152;?#23548;表达目标蛋白。
                SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
                如果培养上清中检测不到表达,则通过将上清浓缩20倍作用再检测,或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达(客户需要提供相关抗体)。
                提供客户:?#25105;?#19968;个客户需要的阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。
                时间:2周
                ?酵母表达系统——步骤4. P. Pichia表达菌株表达优化:
                挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选,并对其中表达最好菌株优化表达条件。
                对挑选出来的单克隆菌株,优化培养及诱导条件(培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等),提高目标蛋白的表达量。
                提供客户:?#25105;?#19977;个客户需要的阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告。
                时间:2周
                ?酵母表达系统——步骤5.目标蛋白表达及纯化:
                摇瓶培养1L重组酵母菌,诱导表达目标蛋白。
                通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
                通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
                通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
                提供客户:纯化好的目标蛋白1~10mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上。
                时间:2~3周
                ?酵母表达系统——步骤6.目标蛋白的再加工及详细检测
                对生物学活性要求?#32454;?#30340;纯化后蛋白产品进行复性研究。
                内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
                通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。
                服务内容:
                1.复性研究:
                利用多达18种不同复性缓冲液的体系,对目标蛋白进行小量复性试验提供复性后样品供客户检测。
                可根据客户要求,按照其中一种样品的复性条件制备小量的复性蛋白。
                可提供具体的复性缓冲液配方及复性工艺。
                2.除内毒素
                3.过滤除菌
                4.冻干
                5.HPLC检测
                6.质谱检测
                提供客户:加工后的终产品及相关实验和检测报告。
                时间:1~2周
                ?酵母表达系统——步骤7. 大规模制备
                提供客户:合格的目标蛋白及服务报告。
                时间?#30418;?#21830;
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